在玻璃化冷冻后，解冻操作方法建议在1M蔗糖中解冻，在0.5 M蔗糖中稀释，并在基础液中进行5 + 5分钟的洗涤/再水合，有的方法建议在最后两种无糖基础液中只需要5 + 1分钟的再水合时间。我个人认为第一种方法更可靠，下面请允许我分享下自己的理解和一些实践经验。
二甲基亚砜（DMSO）和乙二醇（EG）是胚胎学中使用的毒性最小的渗透性冷冻保护剂。不过，它们也不是完全无害的。胞质内冷冻保护剂的浓度尽管远远低于最初的玻璃化冷冻方法，但是所需的浓度依然很高，而且与普遍的看法即浓度不高于传统的慢速冷冻法相反。解冻后，存在于细胞质中（或囊胚的囊胚腔中）的高浓度冷冻保护剂需要足够时间脱离，而大多是被动的。
同时，卵母细胞和胚胎的代谢状态严重受损，修复也需要时间。不是几分钟，很可能是几个小时。如果在此期间胞质中存在DMSO和EG，修复就会延迟，导致细胞死亡，或影响后续的发育。
在做牛胚胎研究中，我发现牛胚胎克隆和激活后，需要彻底的洗涤。比如，牛的重构胚经DMAP激活后，在操作液中清洗3次，5分钟后再进行体外培养。这一步骤通常发生在深夜，一天的辛苦工作之后，胚胎学家想回家睡觉。因此，对于一些胚胎来说，最后5分钟的清洗时间有时会缩短甚至省略。幸运的是，我们培养的胚胎要么是单独培养，要么是少量共培养，第一批和最后一批之间的差异是相当令人震惊的。几次失败后，我们不得不意识到——无论是否累了、饿了、困了，我们必须进行彻底清洗，否则，一整天的工作就白费了。
如果这种情况发生在DMAP激活液上，或许也有理由相信有可能发生在DMSO和EG上。我开始关注玻璃化冷冻复苏后的情况，发现了一些意想不到的问题。
研究显示，彻底清洗是十分必要的。缺乏这一点可能不会立即导致戏剧性的改变，但结果的一致性将会降低。如果省略最后5分钟，玻璃化后的胚胎会更敏感。如果用微滴单独培养；或大液滴共培养，胚胎彼此接近，生存就会受到损害。此外，不同发育阶段之间存在的敏感性差异也可能产生影响。卵母细胞表面再水合对卵母细胞的伤害可能比晚期胚胎更大。尽管如此，囊胚和扩张囊胚也可能因不精细的操作而受影响。
有些观点可能认为胚胎直接移植，即胚胎在解冻后几分钟，用蔗糖溶液将胚胎直接移植到子宫（指的是牛的胚胎移植）。这是一个完全不同的问题，在那种情况下，我们是幸运的。与培养皿不同的是，子宫提供了一个良好的环境，可以安全有效地补充水分，并适当地更换溶液。同时，这个过程似乎是一致的和缓慢的——不用着急，无需秒表，没有流程。对于人类，对于病人，对于手术室，这种精确的时间安排是非常困难和危险的。
在实验室里，有成百上千的（保守估计的）因素可能导致不一致的结果。我们必须尽力降低风险。为了培养这些胚胎，需要许多人（准父母和他们的家人、医生、胚胎学家、护士、行政人员等）的共同努力。为了消除哪怕是极小会失败的可能性，我们这4分钟的等待可能都是值得的。结果可能不会有惊人的不同，但从长期来看，可能会在一致性方面有一些改善。
